血球计数板的使用方法是什么?
1 .根据待测菌悬液浓度,加入无菌水适当稀释(斜面一般稀释100倍),以每格菌数为限。
2 .取一块干净的血细胞计数板,在计数区盖上盖玻片。
3 .摇匀菌悬液,用滴管吸取少许,从计数板中间台两侧槽沿盖玻片下缘滴加少许。 (不能过多)菌悬浮液充满液体表面张力计数的区域,避免产生气泡,用吸水纸吸取从槽中流出的多余菌悬浮液。 也可以将菌悬液直接滴加到计数区,然后在计数区两侧载物台上不粘附菌悬液,覆盖盖玻片后,上升计数区深度,以免产生泡沫。
4 .静置一段时间,使细胞沉降在计数板上,不再随液体漂移。 将血细胞计数板放在显微镜平台上稳定,先在低倍镜下找到计数区域,再切换高倍镜观察、计数。 生活细胞的折射率和水的折射率相近,观察时请减弱光的强度。
5 .计数区由16个中格组成,对角线方向计数左上、左下、右上、右下4个中格,即100格菌数。 如果是由25个中方格组成的计数区,除上述4个中方外,必须统计中央1个中方格的菌数(即80个小方格)。 计数时应统一规定沉降在格线上的细胞统计,以保证计数的准确性,避免重复计数和漏填。 菌体在大方格双线上时,为减少误差,计数时计数上线不计数下划线,计数左线不计数右线。 即,位于主线和左线上的细胞计入主线,位于主线和右线上的细胞按规定计入相应的线。 见右图:即正式计数细胞为3个。
6 .对于出芽的酵母菌,当芽体达到母细胞大小的一半时,可以作为两个菌体计算。 每个样品重复计数2-3次,每次数值不能相差很大。 否则,应该重新操作。用公式计算每1mL(g)菌悬液中含有的细胞数。
7 .测量结束后,取下玻璃罩,用水将血细胞计数板冲洗干净,不要用硬物清洗或擦拭。 请不要损伤网格刻度。 清洗后自己晒干或用吹风机晒干,放入盒内保存。