血球计数板的使用注意事项有哪些?
《培养液中酵母菌种群数量的动态变化》 实验是一个长期的实验(7天左右),必须提前做好周密的计划,有程序,有时间,有人员。取样法采用每天用血细胞计数器对酵母菌进行计数,计数时应注意以下几个方面。
1、每天同一时间,各组取出本组试管,用血细胞计数器计数酵母菌数,并做记录,连续观察7天。
2、从试管中吸出培养基进行计数前,轻轻摇动试管数次,使酵母分布均匀,防止酵母结块沉降,提高计数的代表性和准确性。误差很小。
3、如果一个小方格内酵母菌过多,难以计数,应将培养液稀释,以利于酵母菌的计数。具体方法是:充分摇匀试管,取酵母培养液1mL,加两倍无菌水稀释,稀释n次,然后用血细胞计数器计数,所得值乘以稀释倍数。每个小方格内含有4-5个酵母细胞为宜。特别是在培养后期,需要对样本进行稀释和计数。
4、活酵母有出芽现象。如果芽达到母细胞的一半大,就可以算作两个细菌。如果芽小于母细胞的一半,它就是一个酵母细胞。
5、对于压在网格边界上的酵母菌,应统计同一边相邻两侧的细菌数。一般应采取“数上线不计下线,数左线不计右线”的原则,其余两侧不计。计数时,如果使用规格为16格25格的计数室,则应取左上、右上、左下、右下四个中间格(即100个小格)的酵母数) 根据对角线位置;如果规格为25格16格的计数板,除了取其对角线的4个位置外,还需要统计位于中央的一个中间格(即80个小方格)内的酵母菌数量。
6、计数一个样品应按两个计数室计算的平均值计算,每个样品可计数三次,然后取平均值。计数时应不时调整焦距,以便观察不同深度的细菌。按公式计算每1ml(或10mL)菌液中所含酵母菌数。
7、血球清洗
使用后,用自来水清洗血细胞计数器,不要用硬物清洗,清洗后自行或用吹风机吹干,或用95%乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水,擦干它。通过显微镜观察每个细胞中是否残留细菌或其他沉积物。如果不干净,必须反复清洗,直到干净为止。