血球计数板的注意事项有哪些?
显微镜计数室。如果前期清洗不到位,或者在存放过程中有污染,或者由于操作不当造成计数室有划痕,如果不及时清洗或更换,都会对以后的计数产生很大的影响实验。因此,每次使用血细胞计数板前,都需要增加计数室的显微镜检查步骤。如果在显微检查中发现计数室脏污,则必须在进行实验前按要求进行清洗和干燥。
摇匀并服用液体。吸取培养液计数前,轻轻摇动试管,使细菌分布均匀,防止聚集沉淀,从而提高计数的代表性和准确性。
先盖上血盖,再加入菌液。菌悬液摇匀后,用血盖盖住血细胞计数板,然后用滴管吸取少许菌悬液,从计数区中间平台沿上部滴一小滴菌悬液血盖边。液体,利用液体的表面张力一次性充满计数区。如果先加菌液再盖血盖玻片,容易加太多菌液使血盖不与血细胞计数器的支撑柱接触,血盖玻片浮在菌液上方,从而导致更高的终计数。由于气泡的产生,计数会很小。
静置一会儿再数数。静置5分钟,待菌悬液不再漂浮,酵母菌全部沉降后,将血细胞计数器置于显微镜下计数。先在低倍镜下找到需要观察计数的大方块和中间方块,将中间方块移至视野中心,再将转换器移至高倍镜下进行计数。
高倍率会降低亮度。在低倍镜下,用小孔径的平面镜,可以清楚地看到血细胞计数器上的酵母。但是,换用高倍率镜头后,即使是平镜和小光圈,视野往往还是一片白茫茫,什么都看不到。这时可以尝试操作遮光装置上的金属遮光片进行遮光处理。因为活酵母和培养液的折射率相近,所以在高倍镜下视野应该变暗。
掌握计数原理。一般情况下,控制好待观察菌液的浓度,使每个小方格内有4、5个细菌细胞为宜。浓度过高可适当稀释。