血球计数板的使用方法是什么?盐城飞舟告诉你!
1、根据待测菌悬液的浓度,加无菌水适当稀释(一般在斜面上稀释100倍),以每个细胞的细菌数为度。
2、取一块干净的血球计数板,并将盖玻片放在计数区域上。
3、摇匀菌悬液,用滴管取少许,沿盖玻片下缘从计数板中间平台两侧凹槽滴入一小滴(不要太多),让细菌悬浮液使用液体的表面张力足以充满计数区域,以免产生气泡,并用吸水纸吸收从槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴在计数区上(不要让计数区两侧的平台沾上菌悬液,以免加盖玻片后增加计数区的深度) ,然后盖上玻璃(不要产生气泡)。
4、静置一段时间,让细胞沉淀在计数板上,不再随液体漂移。将血细胞计数器放在显微镜载物台上并牢固夹紧。先找到低倍镜下的计数区域,然后切换到高倍镜观察计数。由于活细胞的折射率与水相似,因此观察时应减弱光的强度。
5、计数时,若计数区由中间16个方格组成,则按下列顺序分别计数左上、左下、右上、右下的4个中间方格(即100个小方格)内的细菌数量对角线方向。如果是由25个中间方格组成的计数区,除了统计上述四个中间方格外,还需要统计中央中间方格(即80个小方格)的细菌数量。为了保证计数的准确性,避免重复计数和漏记,对计数时落在网格线上的细胞的统计应有统一的规定。如果细菌位于大格子的双行上,计数时,计数上行不计数下行,计数左行而不计数右行,以减少误差。即位于该格子的上行和左行的单元格包含在本格子中,位于该格子的下行和右行的单元格按规定包含在对应的格子中。见右图:即这个网格中有3个被计数的单元格。
6、对于芽殖酵母,当芽达到母细胞一半大小时,即可算作二菌。每个样品重复计数2-3次(每次数值不应相差太大,否则应重复操作),并根据公式计算出每mL(g)菌悬液中所含的细胞数。
7. 测量完成后,取下盖玻片,用水冲洗血球计数器。请勿用硬物擦洗或擦拭,以免损坏网格刻度。洗完后,自行擦干或用吹风机吹干,放入盒内保存。